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J Virol:中科院上海巴斯德所钟劲课题组建立新型埃博拉病毒迷你博狗官方中文德州扑克论坛组复制子

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摘要 : 2017年9月6日,国际病毒学领域权威学术期刊《Journalof Virology》在线发表了中国科学院上海巴斯德研究所钟劲课题组题为“Novel stable Ebola virus minigenome replicon reveals remarkable stability of the viral genome”的研究论文。
2017年9月6日,国际病毒学领域权威学术期刊《Journalof Virology》在线发表了中国科学院上海巴斯德研究所钟劲课题组题为“Novel stable Ebola virus minigenome replicon reveals remarkable stability of the viral genome”的研究论文。研究建立了新型埃博拉病毒迷你博狗官方中文德州扑克论坛组复制子。博士后陶万银和博士研究生甘天喻为论文第一作者,钟劲研究员为论文通讯作者。 埃博拉病毒(Ebola virus,EBOV)能引起人类和其他灵长类严重的出血热且病死率极高,对人类公共卫生安全造成潜在的威胁。截至目前,还没有针对性的药物或疫苗得到批准,因此必须加深对该病毒的研究。然而,由于能研究埃博拉病毒的博狗官方网站首页安全四级实验室非常稀少,使得该病毒的研究进程受到了阻碍。埃博拉病毒迷你博狗官方中文德州扑克论坛组(minigenome)系统的建立让很多科研人员有机会在博狗官方网站首页安全二级实验室中对其进行研究。可是,这个系统也存在一些问题:一是需要将六个质粒同时转入一个细胞,因此需要非常高的转染效率和精确的质粒配比;二是这个系统只能实现埃博拉病毒迷你博狗官方中文德州扑克论坛组瞬时的复制和转录。 博狗官方网站构建了一种新型埃博拉病毒迷你博狗官方中文德州扑克论坛组复制子细胞模型。埃博拉病毒迷你博狗官方中文德州扑克论坛组可以在表达四种病毒蛋白(NP,VP35,VP30和L)的细胞中保持数个月的稳定复制和转录。通过比较该复制子系统和之前建立的瞬时转染的埃博拉病毒迷你博狗官方中文德州扑克论坛组系统发现,瞬时转染的迷你博狗官方中文德州扑克论坛组系统的复制水平很低,其反映的主要是病毒的转录步骤。相反稳定复制子系统中有更强的病毒博狗官方中文德州扑克论坛组复制,是一个能更好模拟埃博拉病毒复制的细胞模型,也为在博狗官方网站首页安全二级实验室研究EBOV复制和药物筛选提供了一个更有效的替代工具。 利用该复制子模型,该项工作还探索了干扰素和RNA干扰对埃博拉病毒复制的效果。发现干扰素治疗或RNA干扰不能有效抑制埃博拉病毒迷你博狗官方中文德州扑克论坛组的复制。进一步研究发现埃博拉病毒迷你博狗官方中文德州扑克论坛组vRNA形成的核糖核蛋白(vRNP)具有极强的稳定性,为探索埃博拉病毒长期存在于治愈病人的组织的机制研究提供了重要的思路和工具。 J Virol:中科院上海巴斯德所钟劲课题组建立新型埃博拉病毒迷你博狗官方中文德州扑克论坛组复制子
图. 具有稳定复制和转录能力的EBOV minigenome复制子的建立
A.建立能够稳定表达NP,VP35,VP30和L蛋白的Huh7-4P细胞系的示意图。将含有GLuc和hygromycin博狗官方中文德州扑克论坛的EBOV minigenome(EBOV-GLuc-Hyg)转入Huh7-4P细胞,通过hygromycin筛选构建成稳定的EBOV minigenome复制子。 B.转入EBOV-GLuc-Hyg的Huh7-4P和Huh7-L细胞,用hygromycin进行三周筛选后用结晶紫染色。 C. 转入EBOV-GLuc-Hyg的Huh7-4P细胞上清中的GLuc活性。 原文链接: Novel Stable Ebola Virus Minigenome Replicon Reveals Remarkable Stability of the Viral Genome 原文摘要: Ebola virus (EBOV) causes severe hemorrhagic fever in humans and other primates with a high case fatality rate. No approved drug or vaccine of EBOV is available, which necessitates better understanding of the virus life cycle. Studies on EBOV have been hampered because experimentations involving live virus are restricted to biosafety level 4 (BSL-4) laboratories. EBOV minigenome system has provided researchers with the opportunity to study EBOV under BSL-2 conditions. Here, we developed a novel EBOV minigenome replicon which, to our knowledge, is the first EBOV cell culture system that can stably replicate and transcribe EBOV minigenome. The minigenomic RNA harboring a Gaussia Luciferase and hygromycin-resistant marker can replicate for months in a helper cell stably expressing viral NP, VP35, VP30 and L proteins. Quantification of vRNA, cRNA and mRNA levels of EBOV minigenome demonstrated that the stable EBOV replicon had much more active minigenome replication than previously developed transient transfection-based EBOV minigenome systems which recapitulate viral primary transcription more than genome replication. Interestingly, minigenome replication in the stable EBOV replicon cells was insensitive to interferon treatment or RNA interference. Moreover, RNase digestion of the replicon cell lysates revealed the remarkably stable nature of EBOV minigenomic vRNA ribonucleoprotein complex, which may help understand EBOV persistence in convalescent patients. doi:10.1128/JVI.01316-17   作者:钟劲 点击:
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